目前，用于检测猪轮状病毒的方法很多，包括病毒分离培养鉴定、病毒电镜观察、酶联免疫吸附试验(ELISA )、免疫层析试纸条方法、分子生物学检测方法等。
病毒分离为实验室PRVD确诊的金标准，RV初次分离时需要添加胰酶，病毒分离操作繁琐、时间长，不利于疾病的快速诊断确诊。电镜观察为将仔猪粪便及肠道内容物等病料，磷钨酸负染后，置电镜下观察，能直观看到病毒粒子形状和大小。但电镜价格昂贵，观察时需要经验丰富人员，当存在多病毒混感时仅靠形态观察很难区分[9]。王振玲等[10]采集仔猪病料用Marc-145细胞培养，分离到1株轮状病毒，连续盲传至4代出现细胞病变，用Marc-145细胞进行病毒噬斑纯化，挑取单克隆病毒株扩大培养后，将病毒感染Marc-145细胞7 d后，应用Reed-Muench法计算轮状病毒TCID50为106.6/0.1mL，用感染细胞超薄切片进行电镜观察，可见典型的晶格状排列的轮状病毒粒子。
ELISA是根据抗原与抗体结合原理来对PRVD进行诊断，可用于血清抗体检测或病原检测，一次可检测大量样品，灵敏度高，检测速度快。孟柳等[11]建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明，该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为：猪抗RV IgG包被浓度为4 μg/mL，兔抗RV IgG最佳工作浓度为3.5 μg/mL，样品反应时间为90 min，酶标抗体工作浓度为1:8 000，以D450nm≥0.161作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%，最低检测限为1.25 μg/mL，并与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应。免疫层析试纸条方法在临床应用较多，操作简便，10分钟左右出结果，不需要仪器和设备，刘兆磊等[12]制备了一种检测猪RV抗原的胶体金免疫层析试纸条。结果表明，所制备的试纸条用于检测猪RV感染的MA104细胞培养物，在检测线处出现红色反应带，未感染病毒的细胞培养物在检测线处未出现反应条带，试纸条检出病毒培养液（TCID50是10-6.25/0.1 mL）的最低限为1:32稀释，不与相关的腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒发生反应。
分子生物学检测方法是猪RV实验室诊断最常的方法，主要包括常规RT-PCR方法、荧光RT-PCR和环介导等温扩增(LAMP)方法。常规RT-PCR方法是以病毒的RNA为模板进行反转录，再以PCR进行核酸扩增来检测病毒的方法，以其简便、迅速、灵敏等优点在动物疾病诊断上得到了广泛的应用，是早期病毒检测采用的方法，因具有检测时间长、敏感性低、容易产生气溶胶污染等原因逐渐被淘汰。荧光RT-PCR是最常用的猪轮状病毒确诊方法，敏感性高，特异性好，适合临床疾病快速检测。陈如敬等[13]根据GenBank中登录的猪轮状病毒VP6基因序列特征，设计特异性的引物和探针，建立了检测猪RV的TaqMan荧光RT-PCR方法，该方法敏感性高，对病毒的最低检测限度为192拷贝·μL-1，特异性强，对猪常见病原检测均为阴性，重复性好，扩增相关系数为0.999，其组内和组间变异系数分别为0.25%～1.26%和0.31%～1.49%。LAMP方法是一种恒温核酸扩增技术，具有操作简便、快速、高效等特点，适合在现场和基层部门应用。胡兴义等[14]据猪RV VP7基因保守序列，设计特异性引物，建立了猪RV的RT-LAMP检测方法。结果显示，当外引物与内引物浓度比为200 nmol/L:2 400nmol/L（1:12）、Bst DNA聚合酶浓度为0.64 U/μL、Mg2+浓度为2.5 mmol/L、dNTP浓度为1.0 mmol/L，在恒温（60 ℃）条件下作用60 min，扩增效果出现明显"梯状"条带，与其他猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒等无交叉反应，具有良好的特异性，最低检测分子拷贝数为1.0×102拷贝/μL，具有极高的敏感性。
