人工授精操作要点及注意事项

目的：保证精液品质最优，保证全场精液正常供应.

规定：进化验室必须换衣服和拖鞋，净手（肥皂）.

操作程序如下：

（一）采精前的准备工作 ；

1）打开需要预热的电器；

1.空调22-25°c（根据季节调控）；

2.恒温载物台适宜温度为39°c;

3.恒温水浴锅（37-38°c）或（38-39°c）

（注意冬夏季节区别以及操作顺序不同而引起的差别）

4.恒温干燥箱：春冬季节调至37-38°c，夏秋调至36-37°c（注意温差）；

5.恒温磁力搅拌器；

6.精子密度仪；

2）采精杯的制备：先在采精杯内衬一个一次性采精袋，再在杯口覆滤纸，用橡皮筋固定在杯边缘上，松紧合适，使其能沉入2cm左右，制好后放入恒温干燥箱进行预热；

3）运输保温箱打开盖放在空调底下预热；

4）把稀释精液时所用到的烧杯放入恒温干燥箱进行预热；

（二）配制稀释液以及注意事项；

1. 稀释液应在配制好0.5-24h之间使用，30分钟前不可用，最好60分钟后使用，超过24h丢弃；

2. 配置前提前放到室温（实验室）使其升温到室温（22-25°C）；

3. 配置好的稀释液未用完可以用采精袋装起来，排尽空气，用橡皮筋固定好，存于2-8°c的冰箱中，尤其是夏季炎热高温，一定要注意稀释剂的存放；

4. 稀释剂要用干净的双蒸馏水稀释且稀释液要完全淹没在恒温水浴锅内的水中，并盖住水浴锅盖子，水浴锅的温度应控制在36°c或37-38°c或38-39°c（注意冬夏季节的差别以及操作顺序不同而引起的差别）；

5. 双蒸馏水夏季可保存15天，冬季可保存30天，超期不要用；

6. 制得的双蒸馏水盛放在干净的大玻璃水瓶或盛矿泉水的大塑料瓶内以作备用；

7. 稀释剂与双蒸馏水配制的比例是固定的，不可任意改变，若稀释剂较多，即稀释液浓度变大，那么稀释后的精液中精子内外渗透压不等，会使精子向外渗水，导致活力降低甚至死亡；反之，向精液内渗水，同样精液活力降低甚至死亡。一般情况下，一袋稀释剂50g:1000ml蒸馏水（蒸馏水用容量瓶、量筒或用电子秤秤出所要的容积并做好刻度）；

8. 定期清洗双蒸馏水器.为了提高从蒸馏水器出来的蒸馏水质量、制取蒸馏水的速度、蒸馏水的安全与寿命等，建议定期对双蒸馏水器进行清洗。每次清洗使用98%盐酸10ml或使用36%盐酸量大一些；

9. 稀释剂原理：弱酸性环境抑制精子活动，弱碱性环境促进精子活动，所以稀释液要求弱酸性才能抑制精子活动，延长精子寿命；正常精液的PH一般为6.8-7.8,呈中性或弱碱性；

10. 精液稀释的原因：增大体积以提高其利用率；为精子提供一个有利于保存的环境；

（三）采精的操作过程：

1. 将预热好的采精杯从恒温干燥箱取出；

2. 在采精之前先剪去公猪包皮上的被毛（可省），防止干扰采精及细菌污染；

3. 将待采精的公猪赶至采精栏，挤出包皮积尿，用清水清洗包皮，待公猪爬上假母猪台后，用温暖清洁的手（有无手套皆可）握紧伸出的龟头，顺公猪前冲时将阴茎的“S”状弯曲拉直，紧握阴茎螺旋部的第一和第二褶，在公猪前冲时允许阴茎自然伸展，不能强拉。充分伸展后，阴茎将停止推进，达到强直、锁定状态，用清洗瓶(含90%生理盐水）冲洗龟头，再用干净纸巾擦干，开始射精。射精过程中不要松手，否则压力减轻将导致射精中断；直至公猪射精完毕时才放手，注意在收集精液过程中防止包皮部液体等进入精液杯（伸拉阴茎呈一定的弯曲度，近似水平方向）；

4. 采集完精液后，迅速将采精杯交给化验室内人迅速处理原精，将猪赶回；

（四）采精过程中应该注意的事项：

1.采精过程中，公猪停止射精时，不要轻易停止采精即松手，因公猪在整个射精过程中一般会有2---3次等间歇（停止射精）；

2.在采精过程中不要碰阴茎体，否则阴茎将迅速缩回；间歇时要不断刺激阴茎龟头或四指不断松紧刺激阴茎；采精过程中，整个阴茎要偏离公猪身体的方向，以免采精过程中尿液或污物污染；采精结束之后，不要急于去掉纱布或滤纸，尤其是冬天；

3.采精频率：成年公猪每周1-2次，青年猪每周一次，最好能掌握每头猪的采精频率和采精习惯；

（五）精液的稀释过程：

1.原精的处理：去掉罩在采精杯上的滤纸和粘液（胶体和副性腺），注意避免杂物掉入精液中；

A. 先检测后稀释：

1）气味：干净的精液只有一点气味或无味，受包皮液污染的精液气味很大；

2）原精活力的评估（5分制）

1分：无直线运动，包括只做头部或尾部运动及原地转动的精子；

2分：运动速度缓慢，轨迹不规则，或仅做转圈运动；

3分：不明显的直线运动轨迹，运动速度缓慢，精子粘在一起，

4分：呈明显直线运动轨迹，运动速度快，有少量精子扎堆；

5分：尾部呈鞭状快速摆动，呈明显的直线运动轨迹；

以上评估方法仅经验简单描述，供参考，要求精子活力达到3分（包括3分）以上可稀释处理包装使用；

3）根据精液色泽来估计原精液的密度：

1.若成水样，说明含精子很少（<1亿/ml）；

2.若呈乳白色，说明浓度正常，含精子2--4亿/ml；

3.若呈深乳白色，说明浓度很浓，可达4--6亿/ml，此时精液呈云雾状；

4.若精液呈粉红色或红色，说明精液中含血，应弃之，让公猪休息3-6周后可试着采精（料中应多加些矿物质、多维等进行治疗）；

5.若呈黄色或绿色，说明精液中混有包皮液（尿液和细菌等），应弃之；

6.若呈淡绿色，说明精液中可能混有脓液，应弃之；让公猪休息2-3周后可试着采精（料中添加长效广谱抗生素治疗和多加些电解多维保健促愈）；

7.精液中不能有毛发、尘土或其它污物。若显微镜下发现精液中有凝固或成块物质，并其精液凝集其上，说明公猪生殖系统可能有炎症，应弃之；

4）精液密度显微镜的估测：

根据视野中精子分布情况和稠密来分密、中、稀三个等级；

密：整个视野中布满精子，相邻精子之间的空隙小于一个精子的长度，看不清各个精子的活动，含有精子约6亿/ml；

中: 视野中精子较多，可见各个精子活动，相邻精子之间的间隙在1-2个精子长度间，含有精子约3-4亿/ml；

稀：视野中精子很稀少，相邻精子之间的间隙在2个精子长度以上，含有精子约2亿/ml；

B. 插入干净的温度计测量原精液温度并做记录；

C. 用100X显微镜镜检精子活力（也可用400X），活力低于3分弃之；

D. 用电子秤称出原精液的重量（用单独的烧杯来称重，做好标记，避免交叉感染）换算出精液的容量，然后用移液器移取精液到精子密度仪（移液器始终保持垂直），测出精液密度;

2.稀释精液的相关计算

精液的容量=所称重量×0.95

总精子数=容量×密度

瓶数=总精子数/每瓶精子数

（深部精子数为20亿左右，常规精子数为40亿左右，根据实际情况调节）

可分装的瓶数×单瓶所需容量=混合液的总数

混合液总数-原液=所需稀释液

移液器单位换算 1微升=0.001毫升 1000微升=1毫升

3.记录好精液情况，根据平时对每头猪的了解，可根据决定对其所采的精液处理顺序如精液稀释、活力测定、密度测定；

4.根据采精量做1:1或1：2,用玻璃棒或沿玻璃壁缓慢匀速导流，之后用干净的玻璃棒进行匀速搅拌(注意温度、速度、方向等）使精液和稀释液相互渗透，使其得到缓冲，稀释比例一般在1：4----10，至少1:4,不要超过1:10；

5.精液的分装：

精液的包装一般在30-40亿精子/头份（至少20亿精子/头份；至多45亿精子/头份）；输精体积一般在80-100ml，深部为60ml;分装后的精液，要贴上标签，标签上标明公猪品种、耳号、采精时间与处理时间等，一般一个品种使用一个颜色的标签；

（六）精液稀释的注意事项：

1. 采精的精液要在半小时内完成稀释，一定要控制稀释液与精液的温差，最好在1°C之内，但要注意：只可调整稀释液温度，任何情况下都不得调整精液温度；稀释过程中最好停顿2次对所稀释精液进行搅拌；稀释精液前中后尽量减少精液的移动和震动；

2. 精液稀释的每一步操作均要检查活力，活力下降必须查明原因并加以改进；

3. 稀释后的要求静置片刻再做活力检测，精子活力前后没有明显下降，便可以进行分装，输精瓶捏扁后盖上盖子，尽量减少与空气的接触量；

4.分装后的精液瓶要（把水平面朝下，凹面朝上给精液提供最大活动面积，以减少沉淀带来的损失）横躺在有毛巾铺的桌上，再用干燥的毛巾盖上，储存之前，精液必须先冷却到室温（22-25°c），严禁分装后未冷却直接放进恒温冰箱内（17°c或18°c或17-18°c），冷却1-2h;

5.稀释后的精液密度不能过大，否则稀释剂中的营养物质不能提供众多精子的需要，也就是说精液不能保存时间过长，即精液保存不能达到稀释剂规定的天数；

（七）精液的储存：

1. 精液储存要用专用精液储存恒温冰箱，储存在17°c或18°c或17-18°c恒温状态下（此温度下精子的新陈代谢水平降低，将会消耗较少的营养物质及产生较少的废物，从而延长精子的寿命），严禁≤15°C（低于此温度将会损害精子，因猪的精子比其他动物的精子对于低温更为敏感），严禁≥20°C（高于此温度会加快精子的新陈代谢水平，导致精子衰竭，缩短精子的寿命）；密切注意并控制精液储存期间的温度变化对于维护精子的活力和寿命至关重要；

2. 恒温冰箱的温度要恒定，注意夏季模式（宜调4-7档）和冬季模式（1-4档，）每天注意一下冰箱外在显示器显示的温度和冰箱内温度计相互监督对照，并对温度差异常情况做记录，建议每天检查2次（早晚），并做好记录；要放一些冰块（商业冰块）在恒温冰箱内，以防停电等特殊情况；注意冰箱底部平稳以及周围不能离墙太近，要留有足够的空间用来散热（尤其是夏季）；

3. 轻柔的摇匀储存在恒温冰箱中的精液，使之悬浮均匀（2次/天=早晚），摇匀后精液放于干净的铺有干燥的毛巾的桌子上并用毛巾盖上，清点并记录精液的种类和数目；

4. 存放的精液要放于恒温水浴锅回温十分钟，并于38°C恒温载物台进行检测；

5. 精液分装后应尽量在72小时之内用完；

6. 精液瓶（水平面朝下，凹面朝上）在恒温冰箱内要横躺用干燥的毛巾盖上并压紧四角，最多不超过3层；严禁存放其他不必要的东西，例如食品和肉类；

（八）精液处理之后实验室整理；

1. 关闭那些应该关闭的电源；

2. 清洗采精、稀释、分装等整个过程中使用过的用具和仪器，并加以消毒干燥；

3. 清理摆放用具和仪器，如显微镜不用时用袋子套上以防尘土等；

4. 注意避免用于精液配制的用具与清洗剂接触；

5. 清理水槽中的废物、废液，垃圾桶中的垃圾，以及打扫地面卫生，保持干燥；

（九）精液的运输；

1. 精液运输过程中，应注意保持精液瓶或袋子的密封性防止精液外流与产生震荡；

2. 应选择一个能在整个运输过程中维持精液温度的运输箱，要考虑运输过程中的温度变化和运输时间（夏季应用毛巾包裹温度冰袋、冬季应有温水袋放于箱内，注意好配送袋中水的温度要适宜）；

（十）输精前准备工作；

1.人工授精前，员工要分工明确，最好形成固定的规律；

2.根据查情情况，填写配种本，标注配种计划，以确定配种头数与品种，准备输精管；

3.把输精的器具如输精管、剪子、润滑剂、干净的针头、夹子，以及配种本和笔放在一个干净的便携箱内；

4.精液（往日的精液使用之前要活力测定）横躺放于铺有干净毛巾的配种箱内，并用毛巾盖住，四角压紧，在酷暑寒冬配有温度适宜冰袋或保温袋，并用毛巾包裹隔离，且运输过程中减少震动；

5.达到配种地点之后，确定母猪耳号、耳缺号、头数以及床位或栏位，看是否与配种本所匹配；

6．配种员清洁双手，然后用干净的毛巾清水擦洗母猪阴户，清洗瓶清水冲洗第二遍，最后用蒸馏水冲洗第三遍（这时手不应再触碰母猪阴户），冬季可用温水；

（十一）对于输精瓶和输精管的要求:

1.输精瓶最好有一定的弹性和韧性，不要太柔软了（瓶壁薄），那样不利于输精操作.，一次性；

2.输精管的选择：经产母猪选择大头海绵头，后备母猪选择小头海绵头，都是一次性；要注意输精管海绵头牢不牢，不牢固的则容易脱落到母猪子宫内；海绵头内的塑料细管不易过长，否则海绵头过硬，易划伤母猪阴道和子宫颈口的粘膜，若过短，则海绵头太软不易插入或难以输精，输精管细管要具有一定的弹性和韧性，不能太软或太硬，否则容易划伤阴道及子宫颈口粘膜或打折皱不利于输精；

（十二）常规输精及注意事项：

1.输精动作要点：轻插、适深、慢注、轻拔；

2.将输精管呈45度角斜向上插入母猪母猪生殖道，先推进10-15cm，然后平行插入，锁定在母猪子宫颈皱褶内取出合格精液，开始配种；

3．输精前要尽量排净输精管内的空气（以免输精完精液倒流）；输精时，配种员用右手握着精液瓶，左手抚摸母猪乳房或外阴，压背刺激母猪，使其子宫收缩产生负压，将精液吸纳，并且输精时勿将精液挤入母猪生殖道内，防止精液倒流；输精过程中尽量让母猪保持安静，人随猪动，而不是猪随人动，这就要求配种员尽量不哟乱动而改变姿势；输精结束后，让输精管停留在阴道内大约3-5分钟，不要急于拔下，要轻拔并将输精管斜向下与水平面呈45度角，否则易导致精液倒流；

4.精液从17°C或18°C或17-18°C恒温冰箱中取出或从配种箱取出后不需升温，直接用于配种；精液质量优的用于第一次配种，质量良用于第二次配种，质量一般用于第三次配种；

5.每两次输精之间的时间间隔至少为8-12小时；

6.涂润滑剂时，不要触碰到输精管，且不要堵塞输精管孔（特殊情况下可用精液作为润滑剂）；

（十三）深部输精；

1.深部输精，选择经产母猪并记下床位、耳号（后备母猪子宫颈口过窄，不易插入细管）母猪必须保持安静，并至少等待45分钟，避免母猪兴奋而造成的子宫颈收缩，从而为输精做准备；

2.用剪刀剪开外包装，涂润滑剂（不要触碰到输精管，且不要堵塞输精管孔），将内管缩进外管内，根据常规的输精法将海绵头插入母猪体内，外管锁定，待配种员完成5头母猪输精（大概一分钟）时，配种员从第一头母猪开始，将细管缓慢插入子宫颈口，如有阻力不可粗暴插入，旋转尝试细管是否插入，再慢慢插入，注意手捏细管长度为1cm。细管每次进1cm，这样不易折弯，也不会损伤子宫颈；细管推进约10-15cm,（细管必须轻松通过外管，耐心，切勿强行推进，否则会造成母猪子宫内壁的损伤，是不可逆的伤害）；

3.连接输精瓶，缓慢挤压瓶子，让精液进入子宫体内，挤压时间80ml/40-60s,40-60ml/15-30s,可用干净针头扎破精液瓶，注意不要把空气挤进子宫体，输完3-5s,看精液是否回流，没有拔管（拔管时，输精管的高度要高于母猪的外阴部）；

4.深部输精的意义:可以让精子快速直达受孕部位，提高母猪的受孕率、分娩率和活仔数；减少输精时间、精液倒流、精液用量以及成本；